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人γ谷氨酰转移酶(GGT)ELISA试剂盒说明书和原理

发布时间:2019-04-30 14:33 |  点击次数:

l  本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中γ谷氨酰转移酶(GGT)的含量。
l  有效期:
6个月
l  保存条件:2-8

γ谷氨酰转移酶(GGT)ELISA试剂盒实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人γ谷氨酰转移酶(GGT)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人γ谷氨酰转移酶(GGT)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

γ谷氨酰转移酶(GGT)ELISA试剂盒样本处理及要求
1.  血清:全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。
3.  细胞培养物上清或其它生物标本1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材
1.     酶标仪(450nm
2.     高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL
3.     37恒温箱
4.     蒸馏水或去离子水


γ谷氨酰转移酶(GGT)ELISA试剂盒问题解析:
1.试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。
2.加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中12小时,然后在进行离心处理
3.洗板时容易造成误差: 因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动
4.显色问题: 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况
5.终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒
6.读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4
2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
3.  样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37水浴锅或恒温箱温育60min
5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.  每孔加入底物AB50μL37避光孵育15min
7.  每孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

试剂盒性能
1.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
2.  重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 
注释:本公司所有产品仅用于科研,不得用于临床。